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研究领域 (基础、预防、临床、护理、其他)

 

以下为案例

支原体固体培养和液体培养相结合在临床感染诊断中的应用

为了探讨支原体固体培养和液体培养相结合对临床支原体感染诊断的可靠性,用固体培养基与液体培养基对500余份泌尿生殖道分泌物同时作支原体平衡培养。观察并记录固体培养基长出支原体菌落的阳性例数和液体培养基颜色由黄变红且澄清的阳性例数、液体培养基混浊例数和固体培养基杂菌污染影响结果观察例数。

固体培养作为诊断支原体的金标准,可鉴别液体培养的假阳性和假阴性;同时利用液体培养联合药物敏感试验,可快速检测支原体的药物敏感性。因此,有条件的实验室检测泌尿生殖道支原体感染时结合固体培养和液体培养综合判断,可正确而快速地为临床提供诊断和治疗支原体感染的科学依据。


 

 

目前,支原体双相培养法是公认的敏感方法,是流行病学调查、新方法评价的“金标准”。该法的影响因素较多,如采样运送的因素,接种时标本有其他微生物或某些抑制物质,都会出现假阴性。这种方法需时间长,不利于早期诊断及治疗。固体培养作为诊断支原体的“金标准”,可鉴别液体培养的假阳性和假阴性;同时利用液体培养联合药物敏感试验,可快速检测支原体的药物敏感性。因此,有条件的实验室检测泌尿生殖道支原体感染时结合固体培养和液体培养综合判断,可正确而快速地为临床提供诊断和治疗支原体感染的科学依据。

主要问题

近几年来,泌尿生殖道的支原体,即解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum Uu)和人型支原体 (M. hominis Mh)感染,在国内受到了很大的重视,就其流行性和耐药等方面涌现了大量的文献报道。在这些报道中,支原体的分离培养和鉴定方法均存在着一些问题。其中,尤为突出的就是仅凭肉汤培养基颜色的变化来判断有无支原体生长,而不是根据它们在固体培养基上的典型菌落形态,这是令人疑惑不解的。有必要就肉汤颜色变化与支原体培养阴阳性结论的问题做进一步探讨。

立题依据

目前常用液体培养支原体,这种方法易污染,造成假阳性或假阴性,因为泌尿生殖道内含有多种微生物,一些耐青霉素产尿素酶(或精氨酸酶)的微生物也会使UuMh)液体培养基出现明显的颜色改变并且出现浑浊或沉淀。固体培养则通过低倍镜下观察解脲支原体棕黑色海胆样菌落和人型支原体油煎蛋样菌落,而确证支原体的存在,同时通过直接菌落计数推断出标本中支原体的真实含量(cfu)。

目前,医院实验室对解脲支原体(Ureaplasma urealyticumUu)和人型支原体(Mycoplasma hominisMh)这二种支原体的培养常采用液体培养法,通过UuMh分解不同底物改变液体培养基的颜色来间接判断其生长并同时进行药敏试验。而固体培养法能在低倍镜下直接观察到支原体特有的典型菌落:解脲支原体为棕黑色海胆样菌落(10~50um)、人型支原体为油煎蛋样菌落(100~300um),是诊断支原体的可靠依据。


2.研究目标(包括阶段目标、最终目标、成果水平,社会、经济效益及推广应用等)

阶段目标

用固体培养基与液体培养基对500余份泌尿生殖道分泌物同时作支原体平衡培养。观察并记录固体培养基长出支原体菌落的阳性例数和液体培养基颜色由黄变红且澄清的阳性例数、液体培养基混浊例数和固体培养基杂菌污染影响结果观察例数。

最终目标

为了探讨支原体固体培养和液体培养相结合对临床支原体感染诊断的可靠性,需要研究支原体液体培养和固体培养效果的差异(阳性率有无统计学差异)。课题研究认为,液体培养抗染污力较差但可快速检测药敏结果;固体培养能直接观察到支原体特有的典型菌落,从而鉴别液体培养中出现的假阳性与假阴性;两者结合对支原体感染诊断效果更理想。

成果水平

该课题在国内率先用实验的方法探讨支原体固体培养和液体培养相结合对临床支原体感染诊断的可靠性,专家组一致认为该项成果达到国内领先水平,对我国医院支原体感染诊断研究有开拓和带动作用。前期XXXX成果居国内领先水平,并获得XXX省科技进步XXX等奖。同时,课题组积极开展科研、培训工作,使全院各方面工作都处于同级医院领先水平。

社会、经济效益

支原体感染是一种性接触传播疾病,有一段时间的潜伏期。支原体可存在于健康携带者,而在性乱者、同性恋、妓女、淋病患者中检出率较高。近年来,大量的流行病学调查、血清学研究结果表明,Mh和某些妇科、男性疾病有关,也和新生儿呼吸道感染、中枢神经系统感染有关。支原体种类繁多、分布广泛,支原体感染是一种常见的性病,具有很强的传染性;而支原体感染给患者造成的危害相当大,由于支原体感染的前期,许多感染者无症状或临床症状不明显。因此,总是不易察觉,也不能够及时的诊断治疗。后期病情发展阶段,给患者带来极大的精神压力和经济压力,也会由此,引发各种社会问题。因此,及时准确的诊断对支原体感染,临床指导合理用药在当前具有重要意义。

本课题组实验室检测泌尿生殖道支原体感染时结合固体培养和液体培养综合判断,可正确而快速地为临床提供诊断和治疗支原体感染的科学依据。这种支原体培养诊断技术的开展为明确诊断及合理用药提供了可靠依据,在为患者缩短病程和减少痛苦的同时,为医院带来了可观的经济效益,赢得了广大患者的信任和赞誉,在一定程度上减少性病引发的社会问题,社会效益也是十分明显的。

推广应用

根据近几年研究资料显示,各型支原体感染率在我国呈上升趋势。尤其是Uu+Mh混合感染 率增高,其耐药率升高到90%以上,可见耐药性在病原体之间传播的严重性。因此,定期检测泌尿生殖道支原体的感染情况及药敏情况是非常必要的。

液体法可以作为支原体的初筛试验,传统培养法支原体检出率低,不适宜常规临床标本的分离培养,而直接固体培养法在解脲脲原体和人型支原体培养上显示了比传统培养法更高的检出率。本课题检测泌尿生殖道支原体感染时结合固体培养和液体培养综合判断,可正确而快速地为临床提供诊断和治疗支原体感染的科学依据,值得在临床工作中推广。

固体培养法以其方便、简单、 快速、 经济、 无创伤、准确等优点,且可以用于早期检测等优点,被越来越多的临床实验室所应用,也被越来越多的患者所接受,适合于基层推广应用。

具体内容

用固体培养基与液体培养基对500余份泌尿生殖道分泌物同时作支原体平衡培养。观察并记录固体培养基长出支原体菌落的阳性例数和液体培养基颜色由黄变红且澄清的阳性例数、液体培养基混浊例数和固体培养基杂菌污染影响结果观察例数。

实验方法

将采集的标本尽快(2 h内)进行接种。棉拭子标本直接划种固体培养基后,置液体培养基基础液中充分搅拌并在瓶壁挤压,将混有标本的培养液用移液器分别吸取100ul移入检测板各微孔中,加2滴矿物油覆盖。将接种好的固体培养基和液体培养条板放入CO2孵箱35℃条件下孵育,48小时后固体培养阳性时外观呈淡红色改变(少量生长时可无变化),菌落于低倍镜(放大40倍)下观察,Uu菌落为棕褐色颗粒或团块状菌落,Mh菌落为不着色典型的油煎蛋样形态;液体培养基颜色由黄色变为红色且澄清者为培养阳性,Uu 24小时观察结果、Mh 48小时观察结果。记录固体培养和液体培养的阳性例数、污染例数及药敏结果。用配对卡方检验比较支原体固体法培养和液体法培养的阳性率和污染率。

 重点解决的科学问题

用配对卡方检验比较支原体固体法培养和液体法培养的阳性率和污染率。重点研究液体和固体培养分别有多少例杂菌污染影响结果观察,差异是否有统计学意义。

该课题在国内率先用实验的方法探讨支原体固体培养和液体培养相结合对临床支原体感染诊断的可靠性,对我国医院支原体感染诊断研究有带动作用。

临床资料

     20XXXX月至201XXXX月,500余例来自本院妇科、皮肤性病科和泌尿科门诊病人,临床均有泌尿生殖道炎症症状,取材前1周内停止服用任何抗菌药物。

取材方法 

专用无菌棉拭子插入男性尿道内2-3cm处;女性先擦去宫颈表面粘液再用无菌棉拭子插入宫颈口1-2 cm处,留置2-3秒钟旋转后取分泌物,取材后立即送检。

 培养基、仪器、试剂 

UuMh混合液体培养基购自珠海市银科医学工程有限公司;UuMh混合固体培养基由上海恩康生物科技有限公司提供。SANYOCO2孵育箱日本生产,普通光学显微镜OLYMPUS德国生产。

 实验方法 

将采集的标本尽快(2 h内)进行接种。棉拭子标本直接划种固体培养基,置液体培养基基础液中充分搅拌并在瓶壁挤压,将混有标本的培养液用移液器分别吸取100ul移入检测板各微孔中,加2滴矿物油覆盖。将接种好的固体培养基和液体培养条板放入CO2孵箱35条件下孵育,48小时后固体培养阳性时外观呈淡红色改变(少量生长时可无变化),菌落于低倍镜(放大40倍)下观察。

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