胡先泳 张宏伟
（武汉市第一医院检验科 湖北武汉 430022）
摘要:目的 探讨丁胺卡那霉素、氟化钠在体外对EDTA依赖性血小板聚集的抑制和解离作用，为临床提供EDTA依赖性假性血小板减少症的更好的解决方案。方法 应用血液分析仪检测添加了阿米卡星，氟化钠或不加药物的EDTA抗凝血中血小板的数目，对比它们在不同时段的变化。结果 即时或1小时内加入药物，两种药物对EDTA依赖性血小板聚集抑制作用效果相近，均能显著地抑制或解离EDTA依赖性血小板聚集；但1小时后加入药物，两种药物对EDTA依赖性血小板聚集的解离作用微弱。结论 1小时内加入丁胺卡那霉素、氟化钠对EDTA依赖性血小板聚集有很好的抑制或解离作用，1小时后加入丁胺卡那霉素、氟化钠对EDTA依赖性血小板聚集的解离作用不佳。
关键词：假性血小板减少；血小板聚集；丁胺卡那霉素；氟化钠；解离。
Dissociative effect of drug on platelet aggregation in EDTA-dependent pseudothrombocytopenia
Hu xian-yong Zhang hong-wei
(Department of Clinical Laboratory of Wuhan N0.1 Hospital 430022)
Abstract:Object To investigate EDTA-dependent inhibition of platelet aggregation of amikacin and sodium fluoride in vitro，and provide the better solution of clinical EDTA-dependent pseudo thrombocytopenia.Method The numbers of platelets in blood with EDTA which was added amikacin ，sodium fluoride or nothing were detected using SYSMEX SP-5000 hematology analyzer and their changes at different times were observed. Result Add amikacin or sodium fluoride immediately or within one hour，the inhibition of platelet aggregation and dissociation of EDTA-dependent platelet aggregation was significantly. While the two drugs after one hour，the dissociation of EDTA-dependent platelet aggregation was not markedly.Conclusion Within one hour after blood collection，adding amikacin or sodium fluoride in blood with EDTA can effectively inhibit and dissociate EDTA-dependent platelet aggregation.
Key words：pseudothrombocytopenia；platelet aggregation；amikacin；sodium fluoride；dissociation
用乙二胺四乙酸(EDTA)盐作为抗凝剂进行血细胞分析是国际血液标准委员会(ICSH)在1993年确定的。EDTA依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTCP）是由于使用EDTA盐抗凝全血后进行血细胞分析，血小板聚集使仪器无法确认血小板而导致血小板计数假性减少的一种体外现象，发生率为0.07%~0.21%[1]。本实验历经半年时间，发现20例EDTA依赖性假性血小板减少症的典型病例，于不同时间分别加入丁胺卡那霉素、氟化钠两种药物，观察其对血小板聚集的抑制及解离作用，为检验人员遇到EDTA依赖性假性血小板减少症时，提供更方便、更有效的解决方案。
1 材料和方法
1.1 标本来源 20例EDTA依赖性假性血小板减少症标本均来自我院2013年1月至2013年6月住院病人，共同特点是血小板减低，但无相应临床症状，涂片检查血小板数不少，并可见血小板聚集现象。
1.2 仪器和试剂 SYSMEX SP-5000全自动血液分析仪及原装试剂；OLYMPUS CX41显微镜；改良牛鲍（Neubauer）计数板；BASO瑞氏-姬姆萨染色液；EDTA-K2抗凝剂真空采血管由武汉志远医疗科技有限公司提供；丁胺卡那霉素由福建省泉州海峡制药有限公司生产；氟化钠由广州化学试剂厂生产；
1.3 试剂配制 取1g氟化钠溶于20ml蒸馏水中，并使其充分溶解。次溶液氟化钠浓度为50g/L，取0.1ml加入标本后，其浓度为5g/L。丁胺卡那霉素为水剂，浓度为100g/L，取0.1ml加入标本后，其浓度为10g/L。
1.4 方法
1.4.1 用EDTA-K2抗凝管抽取患者静脉血，混匀，分装到小试管中，每管0.9ml。1.4.2 取一管分别于即时、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h测定血小板数，并各制作血涂片一张。
1.4.3 于即时、0.5h、1h、1.5h、2h分别加丁胺卡那霉素、氟化钠溶液0.1ml于剩余各管中，并分别与加试剂后0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h测定各管血小板数，并各制作血涂片一张。记录每个血小板数并将结果乘以10/9，此为最终血小板数。
1.4.4 取外周血按《全国临床检验操作规程》（第3版136~137页），采用草酸铵稀释液，用手工法计数血小板数[2]。
1.4.5 将上述制作血涂片用BASO瑞氏-姬姆萨染色液进行染色，于OLYMPUS CX51显微镜观察血小板聚集情况。
1.4.6 统计 数据均以平均值±标准差显示，采用单因素方差分析。若P<0.05，则具有统计学差异。
2 结果
2.1 未加丁胺卡那霉素或氟化钠的EDTA抗凝血，即时测得血小板数与手工法测得血小板数相近，30min后血小板数有不同程度的下降，2h测得结果与手工法血小板数差异显著，观察血涂片可见片尾有成片分布血小板（图1），图A，B（*P＜0.05 VS 手工法组 ；#P＜0.05 VS 不加药物组）。
2.2 即时、0.5h、1h加入丁胺卡那霉素、氟化钠的抗凝血两小时后测得血小板数与手工法血小板数相近（P>0.05），可见1小时内加入丁胺卡那霉素或氟化钠，可以抑制血小板的聚集或使聚集的血小板完全解离，观察血涂片血小板为单个散在（图2）。图B，C和D（*P＜0.05 VS 手工法组 ；#P＜0.05 VS 不加药物组）。
2.3 1.5h、2h后加入丁胺卡那霉素、氟化钠的抗凝血两小时后测得血小板数比加入前测得血小板数普遍升高，但与手工法血小板数仍有显著差异（P<0.05）。可见1小时后加入丁胺卡那霉素、氟化钠，其解离效果较差，不能将聚集的血小板完全解离，观察血涂片可见聚集的血小板（图3），图E和F（*P＜0.05 VS 手工法组 ；#P＜0.05 VS 不加药物组）。
3 讨论
EDTA-PTCP首先于1969年被Gowland等报道[3]。EDTA-PTCP是一种体外现象，而非疾病，没有任何临床意义，这种现象可发生于健康人群及各种疾病的患者，与疾病的发生与好转没有直接关系，甚至有健康人长时间伴随这种现象[4]。
EDTA-PTCP这种现象的发生是由于抗血小板抗体在EDTA存在时导致血小板聚集。这种抗血小板抗体可以是IgG、IgM或IgA，其直接针对隐藏的抗原决定簇[5]，EDTA可诱导其构象发生改变，从而与血浆中可能存在的抗血小板抗体结合而发生聚集[6]。
由于EDTA-PTCP发生率低，再加上近年来历史系统的普及运用，很多检验工作者忽视或者不清楚这种现象，导致了很多误诊，给患者带来了沉重的经济及心理负担，也给自己制造了麻烦。其实只要检测者能够引起重视，这种现象是可以及时发现并消除的。
从本实验可见看出，1小时内在EDTA抗凝血中加入安定卡那霉素或者氟化钠，可以有效抑制血小板的聚集或解离已聚集的血小板。本实验的目的在于为检验人员遇到EDTA依赖性假性血小板减少症时，提供更方便、更有效的解决方案。
在实际工作中，如果出现血小板减低时，首先应该观察仪器有无血小板聚集(platelet clumps)的警示信息及相关散点图异常[7]，观察血涂片是否有血小板聚集现象或者估算血小板数是否与检测值有较大出入，如果为疑, 似EDTA-PTCP，与临床联系、沟通，立即给病人抽血做即时检测，或者在1小时内加入安定卡那霉素、氟化钠于2小时后检测。
参考文献
[1] Yoneyama A,Nakahara K,EDTA-dependent pseudothrombocytopenia- differentiation from true thrombocytopenia[J].Nippon Rinsho,2003,61(4):569.
[2] 叶应抚，王毓三。全国临床检验操作规程[M]。第三版。南京：东南大学出版社，2006年：136~137。
[3] Gowland E,Kay HE,Spillman JC,et al.Agglutination of platelets by a serum factor in the presence of EDTA(J).J Clin Pathol,1969,22(4):460-464.
[4] Bizzaro N.EDTA- dependent pseudothrombocytopenia:a clinical and epidemiological study of 112 cases ,with 10-year follow up[J].Am J Hematol ,1995,50(2):103-109
[5] Brazzaro N,Goidschmeding R,vov dem Bome AE.Platelet satellitism is Fc gamma RⅢ(CD16) receptor-mediated[J].Am J Clin Pathol,1995,103(6):740.
[6] Bizzaro N, Brandalise M. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia.
Association with antiplatelet and antiphospholipid antibodies[J].Am J
Clin pathol,1995,103(1):103-107
[7] 吕国全,顾耀松,罗燕玲.影响血细胞分析仪检测血小板的特点分析[J].临床工程,2009,24(8):118-119
