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大学生课外科研课题立项申报书代写
添加时间: 2014-6-21 10:04:11 来源: 作者: 点击数:1456
大学生课外科研课题立项申报书

编号:大学生课外科研课题立项申报书代写

广东医学院药学院

(学生自申课题专用)

课题名称:鸡矢藤总黄酮提取工艺的研究

课题负责人姓名:林敏

所在年级专业:07级药学

所在班级:05

课题负责人联系方式:

起止时间: 2009 7 月至 2010 7

申请日期: 2009 5 30

广东医学院药学院

00九年四月制

一、 立题依据 (包括申请项目的研究目的和意义,国内外研究现状和发展趋势分析,需解决的关键问题,本项目在理论上的科学价值或在应用中对经济建设的影响等)

研究目的:

1、研究鸡矢藤总黄酮成分提取的最佳工艺;

2、为进一步验证鸡矢藤产生的某种功效,提供物质基础。

研究意义和科学价值:

鸡矢藤是我国民间广为应用的一种传统中草药,在海南作为常用黎药,民间常用鸡矢藤叶、糯米共捣细末,或红糖作汤服,治小儿疳积;根用于治铁打损伤;根与甜酒炒7次,加红花煮鸡蛋服,治白带;鸡矢藤叶、凤尾草各半适量,冲开水加蜂蜜服,制痢疾;鸡矢藤全草捣乱,敷于患处,治毒虫伤。鸡矢藤主要成分含黄酮和环烯醚萜类,目前仅有关于其粗提取物的药理作用研究 ,针对其作为黎药在海南黎族民间的应用疗效,尚需对鸡矢藤活性成分进行深入研究,将对质量标准的制定、规范生药品质等具有一定的指导意义。

黄酮类化合物广泛存在于蔬菜、水果、牧草和药用植物中,是植物在长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产物。许多植物的叶、皮、根和果实中都含有一定量的黄酮类化合物,它们是一类以2一苯基色原酮为母核的多酚化合物,结构中含有酮基,天然黄酮类化合物因其一般为金黄色或淡黄色,故称之为天然黄酮类化合物。最初,这类物质的粗制品仅作为染料应用,20世纪20年代,国外把槲皮素、芦丁用于临床后,才引起人们的关注。60年代末,人们发现黄酮类化合物有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静和镇痛等作用。到70年代,又发现它们有抗氧化、抗衰

老、免疫调节和抗肿瘤等作用。故研究提取黄酮对人体有很大的帮助,而研究她的最佳工艺更可以节约资源,带来更大的经济效益。

国内外研究现状:

1、鸡矢藤在民间广泛应用,具有消食健胃、益气补虚、止咳、止痛、清热解毒、祛风活血、行气解郁之功。主治食积停滞、消化不良、小儿疳积、咳嗽、肾绞痛、风湿病等。临床上主要用于消化不良疾病。

2、生物类黄酮(V),是植物在长期选择过程中产生的次级代谢产物。其已成为国内外天然产物开发利用研究的热点。特别是近年来对其化学结构与生物活性的相关性研究 fstructureactivityrelationship sAR)越来越受重视,这对从自然界中寻找黄酮先导化合物 eadcompounds)~ll进行结构改造或修饰具有重要意义。

3、、现在国内外研究总黄酮提取工艺主要有两类:

(1)现代的提取工艺有: 微波提取法;超声波提取法;高压提取法;

(2)传统的提取方法有: 水煎煮法;乙醇回流法;

超声提取法是利用超声波增大物质分子运动频率和速度,增加溶剂穿透力,提高药物溶出速度和溶出次数,缩短提取时间的浸提方法。尚未找到有关鸡矢藤提取总黄酮的研究。

需解决的关键问题:

1、在没有鸡矢藤有关提取文献参考的基础上,确定好超声波提取各单因素(乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间)的量。

2、寻找各单因素结果表现的规律,绘图得出有效的结论;进行下一步的正交试验,进行有理有据的推敲。以及进一步验证黄酮的存在。

二、研究方案

1、研究目标、研究内容和拟解决的关键问题:

研究目标:

提取鸡矢藤总黄酮,探讨鸡矢藤总黄酮成分提取的最佳工艺;为进一步验证鸡矢藤产生消食健胃、益气补虚、清热解之功,主治食积停滞、消化不良、小儿疳积等提供物质基础和良好的条件。

研究内容:

称取一定量的鸡矢藤粉,加入乙醇,在一定温度下用超声波提取一段时间,鸡矢藤黄酮得率=(粗提物中黄酮总量/鸡矢藤质量)x10O%,分别考察乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间对紫苏叶黄酮得率的影响。在单因素试验的基础上, 超声波提取黄酮的主要影响因素(即提取温度、超声波功率、料液比及提取时间)。进行正交试验,各因素水平如采用正交试验确定的最佳提取条件,考察提取次数对鸡矢藤黄酮得率的影响。后与乙醇回流提取的方法比较,结果分析和总结。

拟解决的关键问题:

1)、在没有鸡矢藤有关提取文献参考的基础上,确定好超声波提取各单因素(乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间)的量。

2)、寻找各单因素结果表现的规律,绘图得出有效的结论;进行下一步的正交试验,进行有理有据的推敲。

3)、用紫外分光光度和芦丁标准品对黄酮含量的测定。

本项目的创新之处:

1)、鸡矢藤的研究还比较不成熟,对它的研究应该进一步加深。

2)、用两种方法比较得出鸡矢藤提取总黄酮的最好的方式。

2、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析:

研究方法:

采用超声辅助提取总黄酮;通过单因素和正交试验来确定提取鸡矢藤的最佳工艺。

技术路线:

鸡矢藤


粉碎 粉碎

等量鸡矢藤粉


乙醇、超声提取法

超声波提取的最佳工艺

乙醇回流提取法

总黄酮

总黄酮


比较得率

结果分析、实验结论


实验方案

1. 材料与方法

1.1 材料

1.1.1材料与试剂 鸡矢藤茎叶冷冻干燥备用,使用前磨碎过60目筛。乙醇、乙酸、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等均为分析纯。芦丁标准品。

1.1.2仪器与设备 超声波、干燥机、贝利微粉机、电子分析天平和荧光发光光度计。

1.2 方法

1.2.1 鸡矢藤总黄酮含量的测定

1)芦丁标准曲线的制备:精密称取芦丁对照品10mg,置50ml容量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得约0.20mg/ml的标准品溶液。再用移液管精密量取0.00(空白),1.02.03.04.05.0ml,分别置10ml容量瓶中,精密加入(50mg/ml)亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6min,再加入(100mg/ml)硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液4ml,最后加无水乙醇至刻度,在波长=510nm,处测吸光度(A)。绘制以吸光度为纵坐标,芦丁对照品溶液浓度为横坐标,芦丁标准溶液浓度与吸光度的关系曲线图。确定芦丁水溶液的的测量范围与吸光度有良好的线性关系。

2)总黄酮含量的测定:精密吸取超声波辅助提取的总黄酮的提取液1.0ml,200ml容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度。精密取此液1.0ml,10ml容量瓶中,精密加入(50mg/ml)亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6min,再加入(100mg/ml)硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液4ml,最后加无水乙醇至刻度,在波长=510nm,处测吸光度(A)。将所得的数据代入芦丁溶液的标准曲线中计算样品中的总黄酮含量,得到曲线关系函数。(提取液根据芦丁标准溶液曲线确定,

1.2.2 超声波提取实验 称取一定量的鸡矢藤残渣,加入乙醇,在一定温度下用超声波提取一段时间,过滤,滤液减压浓缩,冷冻干燥得到鸡矢藤黄酮粗提物。鸡矢藤黄酮得率=(粗提物中黄酮总量/鸡矢藤质量)×100%。

分别考察乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间对鸡矢藤黄酮得率的影响。在单因素试验的基础上,对超声波提取黄酮的主要影响因素(即提取温度、超声波功率、料液比及提取时间)进行L16正交试验,各因素水平如表1所示。采用正交试验确定的最佳提取条件,考察提取次数对鸡矢藤黄酮得率的影响。

1.2.3 不同提取方法的比较 称取10.0 g 样品,采用超声波提取发提取2次得到鸡矢藤黄酮粗提物。同时,(乙醇回流提取)50g鸡矢藤,以80%乙醇 100ml回流提取3次,第一次 1h,第二、三次为05h。合并提取液,回收乙醇,冷冻干燥得到鸡矢藤黄酮粗提物。分别称重,测定鸡矢藤黄酮的得率。

1 正交试验设计

Table 1 The design of orthogonal test

水平 A(提取温度) B(超声功率) C(料液比) D(提取时间)

1

2

3

2 分析

2.1 乙醇浓度对黄酮得率的影响 分别用30%、40%、50%、60%、70%和80%的乙醇溶液为提取剂提取鸡矢藤茎叶黄酮,记录并绘图1分析结果。

2.2 提取温度对黄酮得率的影响 分别在3040506070℃条件下提取鸡矢藤茎叶黄酮,记录并绘图2分析结果。

2.3 超声波功率对黄酮得率的影响 分别在150175200225250 W 超声波下提取鸡矢藤茎叶黄酮,记录并绘图3分析结果。

2.4 料液比对黄酮得率的影响 分别按料液比151101151:20125g/ml)提取鸡矢藤茎叶黄酮,记录并绘图4分析结果。

2.5 提取时间对黄酮得率的影响 分别对鸡矢藤茎叶黄酮提取1020304050 min,记录并绘图5分析结果。

2.6 正交试验结果 在单因素试验的基础上,进行L16正交试验,以鸡矢藤黄酮得率为试验指标,试验结果见表2。由表2可知,各因素对鸡矢藤茎叶黄酮得率的影响的大小关系,从而在试验设定的范围内,得出最佳方案。

2 正交试验结果

Table 2 The results of orthogonal experiment

序号列 A(提取温度)B(超声波功率)C(料液比)D(提取时间)黄酮得率

10

11

12

13

14

15

16

2.7 提取次数对黄酮得率的影响 在正交试验结果的基础上,对鸡矢藤茎叶黄酮分别提取1234次,记录并绘图6分析结果.

2.8 不同提取方法比较 超声波提取与传统浸提法的提取效果见表3.

3 2种提取法比较

Table 3 The comparison between two kinds of extraction methods

提取方法 提取剂用量  提取时间    得率      黄酮含量

超声波提取法

乙醇回流法

4、年度研究计划、预期进展及考核指标:

年度研究计划及预期进展:

我们将在暑假之前用每周一天的时间开展计划和研究工作,暑假时我们将拿所有的时间投入不断实践和探讨研究。

考核指标:

记录并分析乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间对紫苏叶黄酮得率的影响。

通过单因素试验,得出超声波提取鸡矢藤黄酮的最佳方案。

通过正交试验,得出最佳提取次数。

比较鸡矢藤超声波与乙醇回流提取法的黄酮得率。

5、预期研究成果及其形式(工作报告、论文、专利、产品和社会效益、经济效益等

论文

三、项目负责人及主要研究人员情况

性别

学历

班级

电话

其它通迅

主要负责人

林敏

本科

05

13412421457

科研小组成员

叶陈丽

本科

05

15899618322

指导教师

性别

学院

职称

电话

其它通迅

典灵辉

药学院

副教授

21512940

主要协作单位(院外)及分工

四、研究基础

1、申请者的学习工作经历、研究工作积累和已取得的研究成绩简介(近三年主要研究工作和结果,主要著作、论文、成果及专利情况等):

我们科研小组,虽然没有从事过科研,但我们注重科研并各有特长,同时认真上好每一次实验课,并把理论应用于实践中,做好每一个实验,仔细观察每一次实验现象,思考每一个实验结果,并且在实践中得到启发。注重理论学习,不断积累专业知识。从图书馆丰富的知识宝库中,汲取营养。针对我们的专业,寻找更广泛的知识,来巩固我们的知识,并不断创新。从网络无尽的领域中,更新我们的思想。科研是我们学习和积累经验的过程,我们相信我们会做好科研工作。

2、研究工作已具备的条件(含技术力量、仪器设备、实验动物及本项目做了哪些工作等):

现在我们学校已具备的条件:

1. 贝利微粉机 济南倍力粉技术工程有限公司WXJ6

2. 电子分析天平 岛津 BL-220H

3. 荧光、磷光、化学发光光度计 PerkinElmer LLC/LS-55

我们已经查阅了大量文献,做好技术准备了。

3、尚缺少的实验条件和拟解决的途径:

六、申请者承诺

我保证本申请书所填内容真实。如果获得资助,我与本项目组成员将严格遵守广东医学院有关规定,切实保证研究工作时间,按计划认真开展研究工作,按时完成科研项目内容和报送有关材料。

主要负责人(签名):林敏

2009 5 30

七、审批意见

指导老师意见(请就本项目的创新性、可行性及研究成果的意义发表意见):

指导老师签名:

评审专家意见(请就本项目的创新性、可行性及研究成果的意义发表意见):

评审专家签名:

院长审批意见:

院长签名:

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