研究目的:

1、研究鸡矢藤总黄酮成分提取的最佳工艺；

2、为进一步验证鸡矢藤产生的某种功效，提供物质基础。

研究意义和科学价值：

鸡矢藤是我国民间广为应用的一种传统中草药，在海南作为常用黎药，民间常用鸡矢藤叶、糯米共捣细末，或红糖作汤服，治小儿疳积；根用于治铁打损伤；根与甜酒炒7次，加红花煮鸡蛋服，治白带；鸡矢藤叶、凤尾草各半适量，冲开水加蜂蜜服，制痢疾；鸡矢藤全草捣乱，敷于患处，治毒虫伤。鸡矢藤主要成分含黄酮和环烯醚萜类，目前仅有关于其粗提取物的药理作用研究 ，针对其作为黎药在海南黎族民间的应用疗效，尚需对鸡矢藤活性成分进行深入研究，将对质量标准的制定、规范生药品质等具有一定的指导意义。

黄酮类化合物广泛存在于蔬菜、水果、牧草和药用植物中，是植物在长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产物。许多植物的叶、皮、根和果实中都含有一定量的黄酮类化合物，它们是一类以2一苯基色原酮为母核的多酚化合物，结构中含有酮基，天然黄酮类化合物因其一般为金黄色或淡黄色，故称之为天然黄酮类化合物。最初，这类物质的粗制品仅作为染料应用，20世纪20年代，国外把槲皮素、芦丁用于临床后，才引起人们的关注。60年代末，人们发现黄酮类化合物有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静和镇痛等作用。到70年代，又发现它们有抗氧化、抗衰

老、免疫调节和抗肿瘤等作用。故研究提取黄酮对人体有很大的帮助，而研究她的最佳工艺更可以节约资源，带来更大的经济效益。

国内外研究现状：

1、鸡矢藤在民间广泛应用，具有消食健胃、益气补虚、止咳、止痛、清热解毒、祛风活血、行气解郁之功。主治食积停滞、消化不良、小儿疳积、咳嗽、肾绞痛、风湿病等。临床上主要用于消化不良疾病。

2、生物类黄酮(V)，是植物在长期选择过程中产生的次级代谢产物。其已成为国内外天然产物开发利用研究的热点。特别是近年来对其化学结构与生物活性的相关性研究 fstructure—activityrelationship， sAR)越来越受重视，这对从自然界中寻找黄酮先导化合物 eadcompounds)~ll进行结构改造或修饰具有重要意义。

3、、现在国内外研究总黄酮提取工艺主要有两类:

(1)现代的提取工艺有： 微波提取法；超声波提取法；高压提取法；

(2)传统的提取方法有： 水煎煮法；乙醇回流法；

超声提取法是利用超声波增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶出次数，缩短提取时间的浸提方法。尚未找到有关鸡矢藤提取总黄酮的研究。

需解决的关键问题：

1、在没有鸡矢藤有关提取文献参考的基础上，确定好超声波提取各单因素（乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间）的量。

2、寻找各单因素结果表现的规律，绘图得出有效的结论；进行下一步的正交试验，进行有理有据的推敲。以及进一步验证黄酮的存在。

1、研究目标、研究内容和拟解决的关键问题：

研究目标：

提取鸡矢藤总黄酮，探讨鸡矢藤总黄酮成分提取的最佳工艺；为进一步验证鸡矢藤产生消食健胃、益气补虚、清热解之功，主治食积停滞、消化不良、小儿疳积等提供物质基础和良好的条件。

研究内容：

称取一定量的鸡矢藤粉，加入乙醇，在一定温度下用超声波提取一段时间，鸡矢藤黄酮得率=(粗提物中黄酮总量／鸡矢藤质量)x10O％，分别考察乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间对紫苏叶黄酮得率的影响。在单因素试验的基础上， 超声波提取黄酮的主要影响因素(即提取温度、超声波功率、料液比及提取时间)。进行正交试验，各因素水平如采用正交试验确定的最佳提取条件，考察提取次数对鸡矢藤黄酮得率的影响。后与乙醇回流提取的方法比较，结果分析和总结。

拟解决的关键问题：

1）、在没有鸡矢藤有关提取文献参考的基础上，确定好超声波提取各单因素（乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间）的量。

2）、寻找各单因素结果表现的规律，绘图得出有效的结论；进行下一步的正交试验，进行有理有据的推敲。

3）、用紫外分光光度和芦丁标准品对黄酮含量的测定。

本项目的创新之处：

1）、鸡矢藤的研究还比较不成熟，对它的研究应该进一步加深。

2）、用两种方法比较得出鸡矢藤提取总黄酮的最好的方式。

2、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析：

研究方法:

采用超声辅助提取总黄酮；通过单因素和正交试验来确定提取鸡矢藤的最佳工艺。

技术路线:

粉碎 粉碎

			等量鸡矢藤粉

乙醇、超声提取法

	总黄酮				总黄酮

比较得率

实验方案：

1. 材料与方法

1.1 材料

1.1.1材料与试剂 鸡矢藤茎叶冷冻干燥备用，使用前磨碎过60目筛。乙醇、乙酸、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等均为分析纯。芦丁标准品。

1.1.2仪器与设备 超声波、干燥机、贝利微粉机、电子分析天平和荧光发光光度计。

1.2 方法

1.2.1 鸡矢藤总黄酮含量的测定

（1）芦丁标准曲线的制备：精密称取芦丁对照品10mg，置50ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得约0.20mg/ml的标准品溶液。再用移液管精密量取0.00（空白），1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml,分别置10ml容量瓶中，精密加入（50mg/ml）亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6min,再加入(100mg/ml)硝酸铝溶液0.3ml,摇匀，放置6min,加氢氧化钠试液4ml,最后加无水乙醇至刻度，在波长=510nm,处测吸光度（A）。绘制以吸光度为纵坐标，芦丁对照品溶液浓度为横坐标，芦丁标准溶液浓度与吸光度的关系曲线图。确定芦丁水溶液的的测量范围与吸光度有良好的线性关系。

（2）总黄酮含量的测定：精密吸取超声波辅助提取的总黄酮的提取液1.0ml,置200ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度。精密取此液1.0ml,置10ml容量瓶中，精密加入（50mg/ml）亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6min,再加入(100mg/ml)硝酸铝溶液0.3ml,摇匀，放置6min,加氢氧化钠试液4ml,最后加无水乙醇至刻度，在波长=510nm,处测吸光度（A）。将所得的数据代入芦丁溶液的标准曲线中计算样品中的总黄酮含量，得到曲线关系函数。（提取液根据芦丁标准溶液曲线确定，

1.2.2 超声波提取实验 称取一定量的鸡矢藤残渣，加入乙醇，在一定温度下用超声波提取一段时间，过滤，滤液减压浓缩，冷冻干燥得到鸡矢藤黄酮粗提物。鸡矢藤黄酮得率＝（粗提物中黄酮总量/鸡矢藤质量）×100％。

分别考察乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间对鸡矢藤黄酮得率的影响。在单因素试验的基础上，对超声波提取黄酮的主要影响因素（即提取温度、超声波功率、料液比及提取时间）进行L16正交试验，各因素水平如表1所示。采用正交试验确定的最佳提取条件，考察提取次数对鸡矢藤黄酮得率的影响。

1.2.3 不同提取方法的比较 称取10.0 g 样品，采用超声波提取发提取2次得到鸡矢藤黄酮粗提物。同时，(乙醇回流提取)取50g鸡矢藤，以80％乙醇 100ml回流提取3次，第一次 1h，第二、三次为0．5h。合并提取液，回收乙醇，冷冻干燥得到鸡矢藤黄酮粗提物。分别称重，测定鸡矢藤黄酮的得率。

表1 正交试验设计

Table 1 The design of orthogonal test

2 分析

2.1 乙醇浓度对黄酮得率的影响 分别用30％、40％、50％、60％、70％和80％的乙醇溶液为提取剂提取鸡矢藤茎叶黄酮，记录并绘图1分析结果。

2.2 提取温度对黄酮得率的影响 分别在30、40、50、60和70℃条件下提取鸡矢藤茎叶黄酮，记录并绘图2分析结果。

2.3 超声波功率对黄酮得率的影响 分别在150、175、200、225和250 W 超声波下提取鸡矢藤茎叶黄酮，记录并绘图3分析结果。

2.4 料液比对黄酮得率的影响 分别按料液比1：5、1：10、1：15、1:20和1：25（g/ml）提取鸡矢藤茎叶黄酮，记录并绘图4分析结果。

2.5 提取时间对黄酮得率的影响 分别对鸡矢藤茎叶黄酮提取10、20、30、40和50 min,记录并绘图5分析结果。

2.6 正交试验结果 在单因素试验的基础上，进行L16正交试验，以鸡矢藤黄酮得率为试验指标，试验结果见表2。由表2可知，各因素对鸡矢藤茎叶黄酮得率的影响的大小关系，从而在试验设定的范围内，得出最佳方案。

表 2 正交试验结果

Table 2 The results of orthogonal experiment

2.7 提取次数对黄酮得率的影响 在正交试验结果的基础上，对鸡矢藤茎叶黄酮分别提取1、2、3和4次，记录并绘图6分析结果.

2.8 不同提取方法比较 超声波提取与传统浸提法的提取效果见表3.

表 3 2种提取法比较

Table 3 The comparison between two kinds of extraction methods

4、年度研究计划、预期进展及考核指标：

年度研究计划及预期进展：

我们将在暑假之前用每周一天的时间开展计划和研究工作,暑假时我们将拿所有的时间投入不断实践和探讨研究。

考核指标：

⑴ 记录并分析乙醇浓度、提取温度、超声波功率、料液比、提取时间对紫苏叶黄酮得率的影响。

⑵ 通过单因素试验，得出超声波提取鸡矢藤黄酮的最佳方案。

⑶ 通过正交试验，得出最佳提取次数。

⑷ 比较鸡矢藤超声波与乙醇回流提取法的黄酮得率。

5、预期研究成果及其形式（工作报告、论文、专利、产品和社会效益、经济效益等

论文

姓 名

性别

学历

班级

电话

其它通迅

主要负责人

林敏

女

本科

05

13412421457

科研小组成员

叶陈丽

女

本科

05

15899618322

指导教师

姓 名

性别

学院

职称

电话

其它通迅

典灵辉

女

药学院

副教授

21512940

主要协作单位（院外）及分工

1、申请者的学习工作经历、研究工作积累和已取得的研究成绩简介（近三年主要研究工作和结果，主要著作、论文、成果及专利情况等）：

我们科研小组，虽然没有从事过科研，但我们注重科研并各有特长，同时认真上好每一次实验课，并把理论应用于实践中，做好每一个实验，仔细观察每一次实验现象，思考每一个实验结果，并且在实践中得到启发。注重理论学习，不断积累专业知识。从图书馆丰富的知识宝库中，汲取营养。针对我们的专业，寻找更广泛的知识，来巩固我们的知识，并不断创新。从网络无尽的领域中，更新我们的思想。科研是我们学习和积累经验的过程，我们相信我们会做好科研工作。

2、研究工作已具备的条件（含技术力量、仪器设备、实验动物及本项目做了哪些工作等）：

现在我们学校已具备的条件：

1. 贝利微粉机 济南倍力粉技术工程有限公司WXJ6

2. 电子分析天平 岛津 BL-220H

3. 荧光、磷光、化学发光光度计 PerkinElmer LLC/LS-55

我们已经查阅了大量文献，做好技术准备了。

3、尚缺少的实验条件和拟解决的途径：

指导老师意见（请就本项目的创新性、可行性及研究成果的意义发表意见）：

指导老师签名：

年 月 日

评审专家意见（请就本项目的创新性、可行性及研究成果的意义发表意见）：

评审专家签名：

年 月 日

院长审批意见：

院长签名：

年 月 日